Agilent 1260 HPLC使用步骤

2025-05-29

开机前准备

1.1 流动相准备

有机相如甲醇、乙腈使用色谱级，水相使用娃哈哈纯净水（水相三天必须更换一次，防止水相污染以致堵塞系统），其余溶剂如0.1%甲酸水、缓冲盐的使用询问管理人员，最后确认流动相足够开机一次使用。

1.2 色谱柱装柱

选择合适的分析型色谱柱，按色谱柱上箭头方向连接在柱温箱中。

1.3 系统检查

确认洗针液（色谱甲醇或色谱乙腈）足够，废液瓶有足够容量，管路无泄漏或堵塞等。

开机与系统平衡

2.1 启动设备

从上至下依次打开四个仪器电源（模块顺序：四元泵→进样器→柱温箱→检测器），并在“仪器使用登记册”和“HPLC使用登记表”上进行登记（开机时间、色谱柱型号等）。见图1。

2.2 仪器联机

电脑开机，桌面双击“Angilent LC 1260（联机）”软件，进入工作站画面，点击“开启”（仪器自检至全绿），四元泵处右击→点击“瓶填充”（修改为实际体积）→“确定”。见图2、3。

2.3 排气泡

打开排气阀，四元泵处右击→点击“方法”→“B瓶”（甲醇）：0%，流速：1 mL/min→“确定”，至无气泡为止（排A瓶气泡）；“B瓶”（甲醇）：100%，流速：1 mL/min→“确定”，至无气泡为止（排B瓶气泡）；排完气泡后流速调为0 mL/min，再拧紧排气阀。

2.4 冲洗柱子

四元泵处右击→点击“方法”→“B瓶”（甲醇）：95%→流速逐渐上调，等压力稳定后调下一个流速，依次为0.1 mL/min、0.2 mL/min、0.5 mL/min、0.8 mL/min，最后调为1 mL/min，冲洗约10 min，至基线平稳后在“HPLC使用登记表”登记压力值。

2.5 平衡系统

四元泵处右击→点击“方法”→“B瓶”（甲醇）：10%（可根据样品情况调整平衡系统的甲醇比例）→流速1 mL/min→“确定”，平衡约10 min直至基线平稳。

方法设置与运行

3.1 创建方法

3.1.1 设置洗脱方法

四元泵处右击→点击“方法”→可修改梯度洗脱“时间表”；同时“停止时间”与时间表时间保持一致。见图4。

3.1.2 设置柱温

柱温箱处右击→点击“方法”→可设置温度30℃（一般无需改动）。见图5。

3.1.3 设置波长参数

DAD处右击→点击“方法”→可设置波长参数（7个波长/带宽：196/4、203/4、210/4、230/4、254/8、280/8、320/16、365/16，一般无需修改）。见图6。

3.1.4 保存/另存方法

菜单栏处点击“方法”→“保存方法”（更改并保存至当前方法）或者“方法另存为”（另存到自己文件夹下，重命名为自己的方法），整个方法设置好后一定记得在此步保存方法。见图7。

3.2 运行单针

3.2.1 放置液相小瓶

将装有样品的液相小瓶（样品用甲醇或水配置成一定浓度并用0.45 μm微孔滤头过滤）放置在样品盘中（有2个样品盘，每盘有A-F共6列，1-11共11行）。

3.2.2 填写样品信息

菜单栏处点击“运行控制”→“样品信息”→“子目录”选择自己的文件夹→“信号1”选择“日期、时间、样品名称”→填写“样品瓶/位置”（如P1-A1，为第1个样品盘的A列1行）→填写“样品名”→“确定”。见图8。

3.2.3 开始运行单针

进样器处右击→点击“方法”→填写进样体积→“确定”→菜单栏处点击“方法”→调用自己之前保存或新创建的方法→①选择页面左上角的单个瓶子标志后在“仪器控制”页面左上角点击“单次样品”或②菜单栏处“运行控制”点击“运行方法”→即可运行单针。见图9、10、11。

3.3 运行序列

3.3.1 设置序列参数

菜单栏处点击“序列”→“序列参数”→“子目录”选择自己文件→“命名模式”选择“日期、时间、样品名称”→如液相运行太长或需过夜，可以勾选“后序列命令/宏”下的“STANDBY”→“确定”。见图12。

3.3.2 设置序列表

菜单栏处点击“序列”→“序列表”→“样品容器”选择“**66Vials**”，“方法名称”选择合适的方法，“进样源”选择“与方法一致”，其他位置包括“样品位置”“样品名称”“进样量”“进样次数”“样品信息”“数据文件”等填写相关信息→“确定”。见图13。

3.3.3 开始运行序列

菜单栏处点击“序列”→“保存序列模版”（更改并保存至当前序列模版）或者“序列模版另存为”（另存到自己文件夹下，重命名为自己的序列模版）→①选择页面左上角的多个瓶子标志后在“仪器控制”页面左上角点击“序列”或②菜单栏处“运行控制”点击“运行序列”或③菜单栏处“序列”中“序列表”点击“运行”→即可运行序列。见图11、13、14、15。