1.开通氮气和仪器

1.1打开氮气压力阀，检查氮气钢瓶及氮气压力表是否正常，设定氮气的输出压力为约0.3-0.4Mpa。

1.2开启仪器的电源：按Lamp开关（左侧黑色按钮），此时氙灯未被点亮；按System开关（右侧黑色按钮），仪器自检后Status指示灯渐渐变为稳定的绿色

1.3开启电脑，点击电脑桌面的ANMSNitrogen软件图标，弹出吹扫氮气软件。如果显示未连接，则选择左上角处的COM3连接。点击N₂ on only（仅氮气），目的是先吹扫氮气。注意：通氮气至少约30分钟后，才能点亮氙灯光源，长时间（1周以上）未启用仪器，需使仪器通氮气的1-2小时以上。然后可以点击lamp immediate start，点亮氙灯。

2.开启操作软件

2.1必须首先双击电脑桌面Chirascan图标，主界面弹出，随后会自动弹出Pro Data Viewer（如果没有，就点击下方的放大镜）。但是不要点击电脑桌面的Pro Data（放大镜）图标，这时为离线状态（仅可用于查看已有文档，但不能用于扫描测试中）

2.2设定当前工作目录或新建文件夹：

   单击Pro Data界面工具栏中的图标    新建文件夹，并将其设为当前工作目录（点击    ）；

   说明：文件夹和数据文件必须用英文或数字命名，不能用点和句号等特殊标点，否则无法打开数据

3.设置测量参数

3.1设定带宽Bandwidth，开机默认设置为1.0nm。当测量波长大于900nm时，需适当增加带宽，比如

   1.5nm或2nm等，单击set确认 

3.2选择光谱的测量范围（蛋白样品如180-260nm）及步进（1nm），单击set确认

3.3.设置单个数据点的采样时间，默认Time-per-point为0.5s

   说明：设置时间越长，数据信噪比越好，曲线越平滑，但是整个扫描时间会增加，从右侧显示的预估扫描

测量时间可看出。但是实际测试样品时，0.5s已经是很快的速度了！对于蛋白样品，一般推荐0.5-1s；

对于核酸样品，一般推荐1-1.5s。其他样品推荐用0.5 s。

3.4 如需要使用控温，则必须在启动软件之前先开启循环水浴和电子控温器，点击操作界面右上方温度setting后出现选项界面，可以输入设置温度（0-100^oC）

4.实验测量步骤

4.1主界面上方快捷栏中的Spec图标是命名界面，如果是空气背景命名就在Background后填写文件名；

   如果是溶剂或样品命名就在Spectrum后填写文件名。

4.2 测量仪器背景，记录吸收零值（因此后面我们所说的紫外吸收值都是相对于空气背景的吸收）样品 

   仓空置，直接采集空气（氮气）的值，点击Background

4.2测量溶剂

  选择合适的比色皿，装入Buffer或溶剂，单击Acquire后仪器自动开始扫描并采集数据

  说明：放入比色皿时要记住比色皿朝向和样品槽中位置，在一个系列的实验中必须保持用同一个比色皿，

   同样朝向和同样放入位置；0.5mm和1mm比色皿要用垫片牢固，两片式的比色皿要用夹具

点击正在扫描图谱上方Window选项，出现下拉菜单，new windows里点击absorbance，可以显示吸收图谱！！

 如果溶剂里含有盐，盐的浓度越高就会屏蔽很多远紫外波长。比如200mmol盐浓度会屏蔽195nm往左

 的波长。具体情况看absorbance图谱，吸收大于2以上，就认为被屏蔽了。 实际的测量范围可能是  

 185-260，或190-260，或195-260。。。。。

4.3测量样品

   操作同4.2。必须使用上步中同一个比色皿，装入要测量的样品，放入样品槽中（注意比色皿左右朝  

    向），单击Acquire

4.4多次测量

   通常建议对溶剂采集2次，对样品采集3次数据，可勾选主界面左下方的Repeat设置重复次数

测量样品时也必须看absorbance图谱，吸收大于2-2.5以上时，认为这些波长的圆二色信号是噪音。需要截掉这些波长，或者降低样品浓度。

5.数据处理

将所有要处理的数据都拖入同一数据界面，图谱上方点击绿色的D按钮可弹出处理界面

5.1多次重复数据的求平均Average

   首先平均溶剂数据，Buffer的2次测量数据，全部选中后点Average，得到Average:0文件；

   再平均样品数据，Sample的3次测量图谱，全部选中点Average，得到Average:1文件

5.2扣除体系背景（即Subtract Baseline）

   选中溶剂文件，如上步平均后的溶剂数据Average:0，点击Set Baseline；再选中样品数据，Average:1，

   点Subtract Baseline得到Subtracted:0文件

解除背景单击Unset Baseline，选中扣除溶剂后的样品文件Subtracted:0文件，点击Remove Others 

5.3平滑处理Smooth

  选中要平滑处理的文件，如Subtracted:0，点击Smooth，进入Smooth界面，左上角的Window选择平

  滑次数，如4：要满足数据曲线不失真，点OK，得到平滑后的文件

  Smooth(s):0（需保留）和平滑噪音信号Smooth(r):0（需去除）。

5.4 点击图谱左上方的保存图标。

6.数据文件输出

测量得到的原始数据文件会自动保存，但是处理后的数据需要再次保存。

测量数据可以输出为各种格式，如ASCII，CSV，TXT等。CSV的文档可用Excel软件打开。

如果图谱中只有一条曲线，那么另存为simple CSV；如果多条图线，必须另存为prodata CSV。

7.实验结束

实验结束后应严格清洗比色皿，最好用专门的复合表面活性剂在50-60度环境中浸泡清洗10-15min，如Decon 90等，最后要用水洗掉这些活性剂。或者用稀稀酸（2M）或6M盐酸胍清洗。

说明：检查比色皿是否干净，可装入水后测量180-260nm范围CD谱线，看看是否平整并接近零值

关机顺序：

水浴，电子控温器，等电源可以独立关闭。

但是仪器主机关机前，必须先通过Nitrogen软件，点击turn off lamp only，关灯后继续吹扫氮气约5分钟，等灯冷却后，再点击turn off lamp and N₂，然后关闭氮气总阀门。Nitrogen软件永远不要点击右上角的X关闭，直接关电脑主机即可。

最后关闭灯的电源(Lamp)和电子控制系统（System）。