分子相互作用分析系统操作章程

2025-05-29
  1. 实验准备

样本准备:将待分析的生物分子样本进行适当的稀释、缓冲液置换等预处理,确保样本浓度适宜、均一,且处于合适的缓冲体系中,避免杂质干扰实验结果。

耗材准备:根据实验需求,选择匹配的传感器,如用于不同类型分子检测的特定表面修饰传感器;准备干净的样品板,确保无杂质、无污染。

仪器准备:开启Octet®仪器及配套电脑,等待仪器完成自检和初始化。当仪器界面显示正常工作状态,如提示“Ready”等就绪信息后,打开控制软件。

2.实验设置

创建实验方案:在软件中选择合适的实验模式,如动力学分析、亲和力测定等。根据实验目的,设置各项参数,包括检测时间、温度、振荡速度等。对于动力学分析,需设置结合、解离阶段的时间;亲和力测定则要确定样本浓度梯度等参数。

传感器与样本设置:在软件界面中,准确录入传感器类型、样本板布局信息,确保软件能正确识别和控制实验流程。

  1. 装载样本与传感器

装载传感器:打开仪器罩门,小心地将选定的传感器安装到仪器的传感器臂上,确保安装牢固且位置正确,避免传感器倾斜或松动影响检测精度。

添加样本:将预处理好的样本按预先设置的布局,准确加入到样品板的相应孔位中。添加过程中避免产生气泡,保证样本量充足,防止检测过程中样本干涸影响结果。

  1. 运行实验

启动检测:关闭仪器罩门,在软件界面中确认各项设置无误后,点击“运行”按钮启动实验。仪器开始自动进行检测,传感器会浸入样本中,实时监测生物分子间的相互作用信号。

实时监控:实验运行过程中,通过软件界面实时观察检测曲线和数据变化,确保实验平稳进行。若出现异常波动、信号中断等情况,及时记录并分析原因,必要时暂停或终止实验进行排查。

  1. 数据处理与分析

数据采集:实验结束后,仪器自动采集并存储完整的实验数据,包括结合曲线、解离曲线、动力学参数等。

数据分析:使用软件自带的数据分析工具,对采集的数据进行处理,如拟合曲线、计算亲和力常数(KD值)、结合速率(kon)和解离速率(koff)等关键参数。根据实验目的和数据特点,选择合适的分析方法,确保结果准确可靠。

  1. 仪器清理与维护

样本清理:实验结束后,及时取出样品板,妥善处理剩余样本,避免样本残留污染仪器。用清水或适当的清洁剂清洗样品板,晾干备用。

传感器清理:按照仪器操作手册的要求,对使用过的传感器进行清洁或更换。若传感器可重复使用,用专用清洗液浸泡、冲洗,去除残留生物分子;不可重复使用的传感器,按规定进行废弃处理。

仪器表面清洁:关闭仪器电源,使用干净的软布擦拭仪器表面,去除灰尘、污渍等。定期使用温和的消毒剂进行消毒,保持仪器清洁卫生。