1. 目的

建立Motic-AE31E/EF-INV荧光显微镜的标准操作程序，确保测量结果的可靠性。

2. 适用范围

对Motic-AE31E/EF-INV荧光显微镜的操作。

3. 责任

操作工对该规程的实施负责、生产管理人员对本规程的有效执行承担监督检查责任。

4. 注意事项

4.1 开启设备电源开关时谨防触电；

4.2 不得以手或其它物体触摸或擦拭仪器光学镜面；

4.3 不得擅自改动调整设备部件；

4.4 必须严格按照此标准操作规程进行操作；

4.5 使用荧光显微镜的过程中严禁频繁启闭汞灯；开启后欲暂停使用时，不可切断电源，可用光阀阻断光路；

4.6 当汞灯熄灭后，禁止立刻重启，经20-30 min，汞灯冷却后再通电重启；

4.7 对于镜头表面的清洁，首先用洗耳球将浮表的灰尘吹掉，如若仍有污物存在，最好用柔软干净的刷子或纱布清除。蘸上无水乙醇与乙醚的混合液(无水乙醇3：乙醚7)的纱布或镜头纸可除去指纹、油脂等污迹。因无水乙醇及无水乙醇与乙醚的混合液均易燃烧，禁止在有明火的环境中操作。不要用纱布或镜头纸对同一区域多次擦试。

4.8 操作过程中如发生异常现象则参照仪器使用说明书进行故障排除并记录上报。

5. 操作规程

5.1 开机准备

5.1.1环境与样本制备

暗室条关闭环境光源，以减少背景干扰。

样本要求：荧光标记的玻片样本（如组织切片、细胞爬片），封片时避免气泡。

自动系统：打开显微镜电源，荧光光源（汞灯/LED），等待光源稳定（汞灯需预热15-30min）。

启动电脑和成像软件（如Motic Analysis BLO等）。

汞灯开启后，30min内不要关闭，

5.2样本放置与调焦

将玻片样本置无载物台上，盖玻片朝上，用夹片器固定。

先使用透射光模式（明场）10x低倍物镜，先粗后细。

通过调节粗准焦螺旋、载物台调节旋钮找到样本位置，后调节细准焦螺旋聚焦。

5.3荧光观察

关闭透射光，切换荧光光源

（1）根据染色剂的特性不同，旋转荧光源转盘至目标通道（DAPI/FITC/TRITC等）。

（2）打开光栅（SHUTTER），荧光照射到载玻片上，通过光强调节旋钮或软件控制激发光强度。（初始设为低强度20%，避免淬灭）

（3）调节显微镜焦距至荧光信号清晰：先用低倍镜定位目标区城，再切换至高倍镜。

5.4图像采集

• 在软件中调节曝光时间、增益等参数，捕获图像。（初始建议自动测光，手动微调）
• 荧光参数设置

单击选项按键进入各项参数的界面。单击曝光，调节6.52，目标亮度调为170，增益调为21.5，亮度偏移0，增强为255，伽马启用（0.6/50），锐化为0。

• 明场参数设置

单击选项按键进入各项参数的界面。单击曝光，调节成自动，目标亮度调为170，增益调为1，亮度偏移0，增强为255，伽马启用（0.6/50），锐化为0。

5.5拍摄

单通道，直接拍摄

多通道，依次切换滤光块DAPI→FITC→TRTC、软件自动对齐，记录完后，叠加融合。

图片保存TIFF模式

5.6关机与维护

（1）关闭荧光电源

（2）切换回透射光式，降低光强至最小，降低物镜至最低倍。

（3）关闭相机软件、显微镜主机电源。

6．参照

《AE31E倒置生物显微镜使用说明书》

《EF-INV生物显微镜使用说明书》